购物车

全部删除
您的购物车当前为空

GFP Tag Magrose Beads

Name: GFP Tag Magrose Beads
Brand: TargetMol
SKU: C0144
Rating: 5 (4 reviews)

产品编号 C0144 GFP Tag Magrose Beads

绿色荧光蛋白（GFP）及其突变体增强型绿色荧光蛋白（EGFP）广泛用于检测基因表达效率以及目标蛋白的表达和分布。作为标签蛋白，GFP 能使融合的目标蛋白自发荧光，无需依赖抗体或探针，即可实现细胞中目标基因的定位，且受其他物质干扰较小。
TargetMol 的 GFP Tag 琼脂糖磁珠以抗 GFP 抗体为配体，能够特异性结合 GFP、EGFP 及其融合蛋白，而不与 BFP 标签蛋白发生结合。琼脂糖磁珠系列产品具备超顺磁性、快速磁响应性、丰富的羟基官能团，以及均匀的粒径特性，是医学和分子生物学研究中的重要工具。GFP Tag 琼脂糖磁珠可以用于检测和纯化 GFP、EGFP 及其融合蛋白，也可用于免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）实验。

规格	价格	库存
1 mL	待询	20日内发货
1 mL * 5	待询	20日内发货
1 mL * 10	待询	20日内发货

大包装 & 定制

TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。

实验操作小课堂

GFP Tag Magrose Beads产品问题解答

问应该选择磁珠还是凝胶去做免疫沉淀实验呢？

答磁珠适用于特定蛋白质和蛋白质复合物的小规模常规分离，具备高重复性、良好纯度和成本效益等优势。而琼脂糖凝胶更适合用于大量蛋白质或抗体的纯化，因其具有更高的抗体结合能力。然而，在免疫沉淀实验中，抗体的亲和性和特异性比结合能力更为重要。凝胶的过量结合能力可能会增加非特异性吸附或导致珍贵抗体的浪费。因此，免疫沉淀实验通常推荐使用磁珠。磁珠相较于琼脂糖凝胶具有以下优势： a. 结构特点：磁珠是固体球形颗粒，抗体结合在颗粒表面。而琼脂糖凝胶具有多孔结构，可增加结合能力。尽管磁珠没有多孔中心的优势，但其粒径远小于琼脂糖凝胶（约90 μm），较大的表面积与体积比使其具备足够的抗体结合能力。 b. 操作优势：高功率磁铁可将磁珠固定在离心管壁侧面，便于去除裂解液，并避免吸取结合在磁珠上的免疫复合物。磁分离不需要离心，这一特点可以避免弱抗体-抗原结合被破坏，减少靶蛋白的损失。 c. 简化流程：使用琼脂糖凝胶需要离心机等设备，而磁珠仅需磁力架即可完成实验，大幅降低实验时间成本，且操作更加简便。

问用磁珠进行免疫沉淀实验，抗原没有免疫沉淀下来？

答a. 样品中所含的抗原过少，不足以被检测。建议：通过SDS-PAGE或蛋白免疫印迹验证裂解液中蛋白的表达和/或裂解效率；如果需要，加大样品量。 b. Washing Buffer中的成分干扰了抗原与抗体的结合。建议：使用其它缓冲液进行免疫沉淀和漂洗（例如，含有0.5% CHAPS的TBS）。

问用磁珠免疫沉淀后，检测有多条非特异条带？

答有非特异性的蛋白结合在磁珠上。建议：在Washing Buffer中加入50-350mM NaCl。加大洗脱力度和次数。

问用磁珠免疫沉淀后获得的蛋白量低？

答a. 蛋白质被降解。建议：加入蛋白酶抑制剂。 b. 所使用的磁珠量不够。建议：提高捕获免疫复合物所使用的磁珠量。 c. 样品中的目标蛋白量不够。建议：提高抗原样品量。

问在免疫共沉淀（IP）实验中，目标蛋白分子量发生变化的原因？

答复合物形成：目标蛋白可能与其他蛋白结合，形成复合物，从而改变其分子量。蛋白降解：目标蛋白可能被酶降解，导致分子量变化。蛋白修饰：目标蛋白在免疫共沉淀前后可能发生了修饰，如磷酸化或乙酰化，影响分子量。解决方案：若目标蛋白在免疫共沉淀前后分子量发生变化，可以进行验证实验，如Western blot或质谱分析。此外，在实验前可对样品进行处理，如使用蛋白酶抑制剂，避免过度处理样品，尽量减少目标蛋白的降解和修饰。

常见问题解答

问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久？

答这个我们暂时没有准确的数据，因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后，不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解，加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话，一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月，冻融三次；但时间长了或者冻融次数多了的话，蛋白还是会发生降解的，不同蛋白降解时间不一样的。

问使用 CCK8 进行实验后，发现读值低，不变色、没差异等，应该怎么办？

答CCK8 在孵育 1-4 小时后，OD 读值在 1-2 之间为佳，线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题，通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。

问TargetMol蛋白酶抑制剂是否可以和其他公司的磷酸酶抑制剂一起使用？

答可以一起使用。

问在做加药实验时，药物对 CCK8 测定是否有影响？如何解决？

答有时会有影响。如果药物具有还原性，会和 CCK-8 发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入 CCK-8，测定 450 nm 的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加 CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加 CCK-8 之前更换培养基，去掉药物的影响。

问三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别

答成分功能均不一样，具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点，如果只想买一支又不确定哪个合适的话，推荐C0002。如果想要更全面的抑制，推荐C0004。

产品特点

磁响应性快速
微球分散性优异
非特异性吸附极低
结合位点丰富

产品应用

检测和纯化GFP、EGFP及其融合蛋白。
免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）实验。

产品信息

GFP Tag 琼脂糖磁珠	特性
基质	磁性琼脂糖微球
粒径	30-100 μm
配体	Anti-GFP Antibody
结合能力	>1 mg GFP标签蛋白/mL 磁珠
磁珠浓度	20%（v/v）
保存溶液	1×PBS，0.02% NaN3

操作说明

一、缓冲液准备

以下为常用的缓冲液成分，适用于多数GFP融合蛋白的纯化，使用时可根据需要进行调整。缓冲液在使用前最好使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。

1)Binding/Washing Buffer：50 mM Tris，0.15 M NaCl，pH7.4。
2)Elution Buffer：0.1 M Glycine-HCl, pH3.0。
3)Neutralization Buffer：1 M Tris-HCl, pH8.0。

二、GFP标签蛋白纯化

1. 磁珠预处理
1)将GFP Tag 琼脂糖磁珠用漩涡振荡器振荡充分混匀，然后使用移液器吸取适量磁珠悬液置于离心管中。将离心管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。
注：磁珠悬液用量需根据样品体积和所含样品含量计算。
2)向离心管中加入与磁珠悬液等量的Binding/Washing Buffer，振荡混匀，使磁珠重新悬浮。接着进行磁性分离，吸去上清液。重复洗涤步骤2次。
注：在进行磁性分离时，为了减少磁珠的损耗，当溶液变澄清后，应先盖紧离心管盖子，保持离心管放置在磁性分离器上。随后，手持磁性分离器与离心管一起上下翻转数次，使澄清的溶液冲刷掉离心管盖上残留的磁珠。静置片刻，待溶液再次变澄清后再进行后续操作。此步骤适用于后续的所有磁性分离过程。

2. 磁珠与目标蛋白结合
1)在预处理后的磁珠中加入样品溶液，并将离心管放置于漩涡混匀器中振荡15 s。
2)将离心管置于旋转混合仪上，室温下旋转混合30 min以上；或者为了防止目标蛋白降解，也可在2~8℃的低温环境下旋转混合1-2 h。
3)将离心管进行磁性分离，将上清液移至新的离心管中备用后续检测。取下离心管，进行后续的洗涤步骤。

3. 磁珠洗涤
1)向装有磁珠的离心管中加入5倍体积的Binding/Washing Buffer，旋转混合2 min，使磁珠重新悬浮，进行磁性分离。将清洗液移至新的离心管中备用，以备取样检测。重复洗涤步骤1次。
2)为避免原离心管壁上的非特异性吸附蛋白污染目标蛋白，向装有磁珠的离心管中加入Binding/Washing Buffer，使磁珠重新悬浮后，将磁珠悬液转移至新的离心管中，进行磁性分离，将上清液移至清洗液收集管中。

4. 目标蛋白洗脱
提供以下几种洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离，收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
注：GFP Tag 琼脂糖磁珠变性洗脱后不可重复使用。
2)非变性洗脱：根据需要确定洗脱体积以调整目标蛋白浓度，加入3-5倍体积的Elution Buffer，室温旋转混合5-10 min，使磁珠重新悬浮，进行磁性分离。将洗脱液收集到新的EP管中，即得到目标蛋白。在洗脱液中加入相当于十分之一洗脱体积的Neutralization Buffer，将pH值调整至7.0-8.0。
注：酸性洗脱后，应立即使用Binding/Washing Buffer平衡磁珠，且GFP Tag 琼脂糖磁珠在洗脱液中停留时间不应超过20 min。

三、IP/Co-IP实验

1. 磁珠预处理
同蛋白纯化。

2. 磁珠与靶蛋白结合
1)向处理后的磁珠中加入含GFP标签的靶蛋白溶液，颠倒混匀。将离心管置于旋转混合仪上，室温下旋转混合30 min；或者为了防止目标蛋白降解，也可在2~8℃的低温环境下旋转混合1-2 h。
2)将离心管进行磁性分离，将上清液移至新的离心管中备用后续检测。取下离心管，加入5倍悬浮液体积的Binding/Washing Buffer，旋转混合2 min，使磁珠重新悬浮，进行磁性分离。重复洗涤步骤2次，即得到靶蛋白-磁珠复合物。
注：如果进行IP实验，跳过第3步，直接进行第4步。如果进行Co-IP实验，请继续进行第3步操作。

3. 目标蛋白与复合物结合
1)向上述GFP融合蛋白-磁珠复合物中加入含目标蛋白的裂解液。将离心管置于旋转混合仪上，室温下旋转混合30 min以上。
2)将离心管进行磁性分离，将上清液移至新的离心管中备用后续检测。取下离心管，加入5倍悬浮液体积的Binding/Washing Buffer，旋转混合2 min，使磁珠重新悬浮，进行磁性分离。重复洗涤步骤2次，即得到目标蛋白-靶蛋白-磁珠复合物。