SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

Catalog No. C0008

SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) 是一种 2× 浓度的即用型预混液，Mix 中含有热启动DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg 2+ 及 Low Rox。使用时，只需加入模板、引物、无菌超纯水便可进Real Time PCR 反应。操作简单方便，降低污染概率。

本品采用的DNA 聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA 聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR 扩增的因子和提升PCR 反应扩增效率的因子，使定量PCR 可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系, 对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。

TargetMol的所有产品和服务仅用于科学研究，不能被用于人体，我们也不向个人提供产品和服务。

规格	价格/CNY	货期
1 mL (100 rxns)	￥ 192	现货
1 mL * 5 (500 rxns)	￥ 768	现货
1 mL * 20 (2000 rxns)	￥ 2,490	现货

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产品应用

基于荧光定量PCR检测
核酸扩增和基因表达
自动化和高通量的定量基因分型研究
基因组学相关应用

适用机型

本品内含 Low ROX Reference Dye，适用于需要校正孔间荧光信号误差的仪器，适用机型如下：
AppliedBiosystems: 7500,7500 Fast,ViiA7,QuantStudio Dx, QuantStudio3 and 5, QuantStudio6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000.

反应体系（以50 μL和20 μL为例，推荐冰上配制）

组分	体积（μl）	体积（μl）	终浓度
qPCR SYBR Green Master Mix (Low ROX)	25	10	1×
Forward Primer (10μM)	1	0.4	0.2μM
Reverse Primer (10μM)	1	0.4	0.2μM
模板DNA	X	X
无菌超纯水	to 50	to 20
总反应体系	50	20

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1\/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

扩增程序（两步法）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95 °C	5 min	1
变性	95 °C	10 sec	40
退火\/延伸	60 °C	30 sec ★	40
溶解曲线阶段	仪器默认设置		1

扩增程序（三步法）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95 °C	5 min	1
变性	95 °C	10 sec	40
退火	55-60 °C	20 sec	40
延伸	72 °C	20 sec ★	40
溶解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集（★）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：
30 sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus,7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31 sec以上：Applied Biosystems: 7300
34 sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
扩增曲线：一般CT值的正常范围为15-35之间，其中20-28之间的定量较为准确。如果CT值过小，则需重新稀释模板；如果CT值过大，则需适当提高模板浓度、提高引物浓度以及调试最佳QPCR程序。
溶解曲线：通常只有溶解曲线为单峰时，才为有效定量结果。如果溶解曲线出现多峰，则需优化条件重新实验，常见方法通常需要重新设计引物等。

注意事项

SYBR Green Master Mix (Low ROX) 在 -80℃ 存放可能会产生白色或淡黄的沉淀，可用手握缓慢溶解，于室温短时间避光放置，轻柔上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。不影响试剂性能。
使用前，请上下轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，然后进行短暂的离心，防止因混合不均匀造成反应效果不佳。
避免反复冻融，防止聚合酶活性下降，可将产品分装保存，以便小剂量的多次使用。
由于SYBR Green I荧光染料随着时间的推移可能会在光照下褪色，从而导致敏感性下降，因此在存储和使用过程中要避免强光照射。
由于qPCR反应的高灵敏度，空气或气溶胶的污染可能导致反应失败或结果不准确。因此请使用无菌的针尖、灭菌过的试管和移液管在清洁的环境中进行qPCR反应
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作，再配置反应体系或者分装时请一定使用新(无污染)枪头、Microtube 等，避免污染。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

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C0008说明书-中文

文献引用

1. Hu J, He Q, Tian T, et al.Transmission of Exosomal TPX2 Promotes Metastasis and Resistance of NSCLC Cells to Docetaxel.OncoTargets and Therapy.2023: 197-210. 2. Meng F, Hu J, Qiang J, et al.scRNA‐seq determines the characteristics of T cell marker genes to predict the prognosis of esophageal cancer.Precision Medical Sciences.2024